免疫細(xì)胞通常難以識(shí)別整個(gè)抗原分子，而僅識(shí)別抗原大分子上的一個(gè)特定的部分，稱為表位(epitope)或抗原決定簇(antigenicdeterminant)。因而表位代表了抗原分子上的一個(gè)免疫活性區(qū)，負(fù)責(zé)與免疫細(xì)胞表面的抗原受體或游離的抗體分子相結(jié)合。嚴(yán)格說(shuō)來(lái)，抗體的特異性是針對(duì)表位而不是針對(duì)完整的抗原分子。

在蛋白抗體的研究工作中，為了使生產(chǎn)抗體獲得較佳效果，仔細(xì)地設(shè)計(jì)抗原是很有必要的，在免疫過程中，該抗原既不會(huì)產(chǎn)生過強(qiáng)的免疫反應(yīng)，同時(shí)又能產(chǎn)生出對(duì)目的蛋白有特異性結(jié)合能力的抗體。需要我們分析蛋白性質(zhì)和特點(diǎn)，根據(jù)實(shí)際應(yīng)用目的制定抗原制備方案。

為了使生產(chǎn)抗體獲得好的效果，仔細(xì)地設(shè)計(jì)抗原多肽是很有必要的，設(shè)計(jì)應(yīng)滿足一個(gè)基本條件：在免疫過程中，該抗原既不會(huì)產(chǎn)生過強(qiáng)的免疫反應(yīng)，同時(shí)又能產(chǎn)生出對(duì)感興趣的蛋白有結(jié)合能力的抗體。

抗原是指一種能刺激人或動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生抗體或致敏淋巴細(xì)胞，并能與這些產(chǎn)物在體內(nèi)或體外發(fā)生特異性反應(yīng)的物質(zhì)。抗原的基本能力是抗原性和免疫原性。

抗原性是指抗原與其所誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體或致敏淋巴細(xì)胞特異性結(jié)合的能力。抗原性的強(qiáng)弱與抗原分子的大小、化學(xué)組成、抗原決定簇的結(jié)構(gòu)等有密切關(guān)系。通常抗原的分子量愈大、化學(xué)組成愈復(fù)雜、立體結(jié)構(gòu)愈完整，則抗原性愈強(qiáng)。

免疫原性是指能夠刺激機(jī)體形成特異抗體或致敏淋巴細(xì)胞的能力。即指抗原能刺激特定的免疫細(xì)胞，使免疫細(xì)胞活化、增殖、分化，產(chǎn)生免疫效應(yīng)物質(zhì)抗體和致敏淋巴細(xì)胞的特性。也指抗原刺激機(jī)體后，機(jī)體免疫系統(tǒng)能形成抗體或致敏淋巴細(xì)胞的特異性免疫反應(yīng)。

抗原性是指抗原與其所誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體或致敏淋巴細(xì)胞特異性結(jié)合的能力。抗原性的強(qiáng)弱與抗原分子的大小、化學(xué)組成、抗原決定簇的結(jié)構(gòu)等有密切關(guān)系。通常抗原的分子量愈大、化學(xué)組成愈復(fù)雜、立體結(jié)構(gòu)愈完整，則抗原性愈強(qiáng)。

免疫原性是指能夠刺激機(jī)體形成特異抗體或致敏淋巴細(xì)胞的能力。即指抗原能刺激特定的免疫細(xì)胞，使免疫細(xì)胞活化、增殖、分化，產(chǎn)生免疫效應(yīng)物質(zhì)抗體和致敏淋巴細(xì)胞的特性。也指抗原刺激機(jī)體后，機(jī)體免疫系統(tǒng)能形成抗體或致敏淋巴細(xì)胞的特異性免疫反應(yīng)。

抗原決定簇是抗原物質(zhì)分子表面或其他部位，具有一定組成和結(jié)構(gòu)的特殊化學(xué)基團(tuán)，能與其相應(yīng)抗體或致敏淋巴細(xì)胞發(fā)生特異性結(jié)合的結(jié)構(gòu)，由連續(xù)或不連續(xù)的蛋白結(jié)構(gòu)組成。一個(gè)天然抗原由多種和多個(gè)決定簇。抗原分子越大，決定簇的數(shù)目越多。結(jié)構(gòu)已經(jīng)確定的抗原決定簇稱為抗原表位。

目前蛋白質(zhì)抗原表位預(yù)測(cè)的方法大致可以分為兩類，一類是基于蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)，像beta-轉(zhuǎn)角、膜蛋白跨膜區(qū)預(yù)測(cè)等；一種是基于氨基酸的統(tǒng)計(jì)學(xué)傾向性，對(duì)每個(gè)氨基酸的表面可接觸性，親水性和彈性進(jìn)行計(jì)算可以大體推算出抗原決定簇區(qū)域。（使用我們的抗原決定簇預(yù)測(cè)軟件可以幫助您分析）

對(duì)于那些困難，較難獲得，分子量小的抗原，可以采取多肽合成的方法。多肽是一種半抗原，其單獨(dú)不能誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，即不具備免疫原性，但當(dāng)其與大分子蛋白等載體偶聯(lián)后可獲得免疫原性，誘導(dǎo)免疫應(yīng)答。

外源性：設(shè)計(jì)多肽序列與被免疫宿主蛋白序列不同源，與自身物種其他蛋白序列不同

結(jié)構(gòu)：序列不形成α-螺旋、內(nèi)部重復(fù)或接近重復(fù)段的序列

親水性：盡可能選在蛋白表面，如上所述，較好的抗原表位具有親水性，親水區(qū)域傾向于集中在蛋白表面，疏水區(qū)域通常包裹在蛋白內(nèi)部。只有抗原更好的溶于水相才能更好地激發(fā)免疫反應(yīng)，因此設(shè)計(jì)的多肽一定要親水性好（可通過銘研的抗原決定簇預(yù)測(cè)工具預(yù)測(cè)親水性）

末端性：為了避免識(shí)別區(qū)域隱藏在蛋白內(nèi)部的風(fēng)險(xiǎn)。一般選擇N端或C端。N段或C段通常暴露在蛋白表面，暴露性更好，更容易制備抗體，但膜蛋白C端疏水性比較強(qiáng)，可選擇N端

長(zhǎng)度和純度：多肽抗原一般設(shè)計(jì)8～20個(gè)氨基酸，一方面為防止蛋白質(zhì)水解，另一方面為了保證表位覆蓋率。鏈太短，產(chǎn)生的抗體與天然蛋白的親和力不強(qiáng)。鏈太長(zhǎng)則易造成二級(jí)結(jié)構(gòu)，使抗體失去其特異性，同時(shí)也增加合成成本。純度大于80%

氨基酸：序列內(nèi)脯氨酸（Pro）不能太多，一兩個(gè)脯氨酸的存在也可使肽鏈結(jié)構(gòu)穩(wěn)定一些，對(duì)產(chǎn)生特異性抗體有力。同時(shí)盡量包括MHC類分子偏好的天冬氨酸（Asp），酪氨酸（Tyr），苯丙氨酸（Phe），避免容易發(fā)生糖基化的氨基酸（如天冬酰胺Asn、 絲氨酸Ser 、蘇氨酸Thr）和磷酸化的氨基酸

初次接觸抗體制備的科研人員，往往對(duì)抗原的選擇猶豫不決。一般來(lái)說(shuō)，天然蛋白優(yōu)于重組蛋白，重組蛋白優(yōu)于多肽。但是，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)無(wú)法通過天然樣本純化或重組表達(dá)獲得時(shí)，多肽的優(yōu)勢(shì)較為明顯。在明確獲知抗原表位的情況下，可以優(yōu)先選擇合成多肽抗原。

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比較	蛋白抗原	多肽抗原
適用性	多種下游應(yīng)用 目標(biāo)蛋白與其他蛋白的同源性較低，且易于表達(dá)和純化	主要應(yīng)用于WB，ELISA或翻譯后修飾檢測(cè) 目標(biāo)蛋白與其他蛋白具有較高的同源性，且很難或無(wú)法表達(dá)和純
優(yōu)點(diǎn)	可在多個(gè)表位產(chǎn)生抗體，所產(chǎn)生的抗體易于與天然蛋白結(jié)合	識(shí)別抗原表位明確 較低的交叉反應(yīng) 抗原結(jié)構(gòu)域的選擇更加靈活 易于合成，成本低，合成周期短
缺點(diǎn)	較高的非特異性交叉反應(yīng) 重組蛋白抗原價(jià)格較高，周期相對(duì)較長(zhǎng)，且可能達(dá)不到天然蛋白的性能	多肽本身不具備免疫應(yīng)答的能力，需要偶聯(lián)載體蛋白偶聯(lián)以增強(qiáng)其免疫原性

注：蛋白抗原，因其針對(duì)多個(gè)表位產(chǎn)生抗體，非特異性交叉反應(yīng)性概率升高。通過親和純化可以幫助消除非特異性，天然存在的抗體補(bǔ)體。但是，這無(wú)法消除對(duì)全長(zhǎng)蛋白序列中包含的同源表位的交叉反應(yīng)性問題。此外，不是所有蛋白質(zhì)都可進(jìn)行親和純化，這取決于它們的溶解度和成功與親和柱偶聯(lián)的能力。

無(wú)論是生產(chǎn)單克隆抗體還是多克隆抗體，抗原的制備、設(shè)計(jì)、分析都至關(guān)重要。西寶生物對(duì)于抗原的制備、分析、設(shè)計(jì)有多年的經(jīng)驗(yàn)。我們會(huì)結(jié)合抗體的用途，綜合考慮同源性、親水性、分子量、結(jié)構(gòu)、純度和長(zhǎng)度等多方面因素，幫您設(shè)計(jì)并制備抗原。

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客戶提供	服務(wù)內(nèi)容		交付內(nèi)容	周期
蛋白序列      或多肽序列	蛋白抗原制備	抗原設(shè)計(jì) 基因合成&構(gòu)建載體 蛋白表達(dá)純化	交付抗原的純度和量(>1mg)均根據(jù)您的需求定制	約4周
	多肽抗原合成	抗原設(shè)計(jì) 合成多肽		約2-3周

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