核酸是分子生物學的基礎(chǔ)，而核酸提取是整個分子行業(yè)繞不過去的門檻，很多時候核酸樣本提取的好壞直接決定了檢測結(jié)果是否生效。多種病毒性疾病檢測多數(shù)采用核酸檢測方法，質(zhì)優(yōu)的核酸提取是保證下游檢測結(jié)果的前提，西寶生物提供多種核心核酸提取試劑，品種齊全，現(xiàn)貨供應(yīng)，省時方便，詳情致電400-021-8158。
核酸提取與純化的應(yīng)用
①分析基礎(chǔ)研究和疾病研究中的基因表達；
②跟蹤對藥療的反應(yīng)（例如，在抗病毒診治期間和之后監(jiān)測病毒滴度）；
③識別新物種并深入了解進化過程（例如，Ancient DNA分析）；
④對人類、動物和植物中引起傳染病暴發(fā)的病原體進行監(jiān)測和分類（例如：2019-nCoV檢測）；
⑤通過微生物檢測和量化監(jiān)測食品和水；
⑥診斷疾病（如基因疾病，癌癥，免疫學缺陷）。
核酸的分離是現(xiàn)代科學的重要成果之一，它給人類生活帶來了大的進步。隨著高通量和自動化提取技術(shù)的應(yīng)用，大大簡化了DNA或RNA的分離過程。此外，下一代測序技術(shù)的發(fā)展推動了核酸分離純化市場的發(fā)展，因為DNA和RNA的純化對獲得準確的核酸數(shù)據(jù)起著極其重要的作用。
核酸提取與純化的原則和要求
1、保證核酸一級結(jié)構(gòu)的完整性
2、排除其它分子的污染（如提取DNA時排除RNA的干擾）
3、核酸樣品中不應(yīng)存在對酶有抑制作用的有機溶劑和高濃度的金屬離子
4、盡可能降低蛋白質(zhì)、多糖和脂類等大分子物質(zhì)
核酸提取純化方法眾多，但關(guān)鍵性試劑原料的質(zhì)量直接影響著核酸提取的純度和質(zhì)量，下面我們介紹一下常見的幾款核酸提取用試劑原料。
焦碳酸二乙酯（DEPC）
CAS：1609-47-8
焦碳酸二乙酯（DEPC）：是一種強烈但不徹底的RNA酶抑制劑，他通過和RNA酶的活性基因團組氨酸的咪唑環(huán)結(jié)合使蛋白質(zhì)變性，從而抑制酶的活性。可以用作抗菌添加劑、組氨酸殘基改性劑，以及用于亞胺轉(zhuǎn)變?yōu)榘被姿狨サ脑噭?/div>蛋白酶K
鹽酸胍 + 尿素
異硫氰酸胍
十二烷基硫酸鈉（SDS）
在溶液中濃度約為 0.1% (v/v) 時可使 RNase 失活，從而防止RNA被降解。
應(yīng)用
用作RNA酶抑制劑。用于提取RNA。
蛋白酶K
CAS：39450-01-6
蛋白酶K是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶，用于生物樣品中蛋白質(zhì)的一般降解。滅活核酸酶(DNase和RNase) , DNase和RNase也用于去除不需要的核酸,有人使用蛋白酶替代DEPC處理水，蛋白酶K是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵。在較廣的pH范圍內(nèi)均有活性(pH4-12.5)溫度范圍37-60度鹽濃度3mGuHCI或4m尿素中均有活性，在一些去污劑:Tween20 (5%)、Triton X-100 (1%)和SDS (1%)條件下也有活性。蛋白酶K的一般工作濃度是50-100ug/ml
蛋白酶K消化裂解法適用于所有標本的消化處理,尤以DNA樣品為佳.如組織細胞(包括石蠟包埋組織)絨毛、毛發(fā)、精斑、血液(血清、血漿、全血)局部分泌物、尿,糞便等。
鹽酸胍 + 尿素
CAS：50-01-1 + CAS：57-13-6
鹽酸胍是一個核酸酶的強抑制劑,它并不是一種足夠強的變性劑,可以允許完整的RNA從富含Rase的組織中提取出來。核酸提取過程中用于使核酸結(jié)合在硅質(zhì)上，4-8M可斷裂氫鍵,有兩種可能機制:
1、變性蛋白和鹽酸胍、尿素優(yōu)先結(jié)合,形成變性蛋白-變性劑復合物,當復合物被除去,從而引起N-D反應(yīng)平衡向右移動,隨著變性劑濃度增加,自然的蛋白不斷轉(zhuǎn)變?yōu)閺秃衔?導致蛋白質(zhì)變性;
2、鹽酸胍、尿素對氨基酸的增溶作用,能形成氫鍵,當濃度高時,能破壞水的氫鍵結(jié)構(gòu),結(jié)果鹽酸胍、尿素就稱為非極性殘基的較好溶劑,使蛋白質(zhì)內(nèi)部的疏水殘基伸展和溶解性加強,鹽酸胍、尿素引起的變性往往是不可逆的。高濃度尿素使蛋白質(zhì)變性并抑制Rnase活性.
應(yīng)用
作為提取細胞總RNA實驗中的強烈變性劑。鹽酸胍溶液可溶解蛋白質(zhì)，導致細胞結(jié)構(gòu)破壞，核蛋白二級結(jié)構(gòu)破壞，從核酸上解離下來，此外，RNA酶可被鹽酸胍等還原劑滅活。
異硫氰酸胍
CAS：593-84-0
異硫氰酸胍作為強力的蛋白質(zhì)變性劑,能迅速溶解蛋白質(zhì),導致細胞結(jié)構(gòu)破碎,核蛋白由于其二級結(jié)構(gòu)的破壞消失而迅速與核酸分離。胍鹽是破壞蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)的離液劑,在通常使用的蛋白質(zhì)變性劑中作用強勁的是異硫氰酸胍,它們可以使多數(shù)蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)換成一隨機的卷曲狀態(tài)。在還原劑存在的情況下,異硫氰酸胍可以斷裂氫鍵。
總RNA抽提試劑常用的是TRIZol法，它可以直接從細胞或組織中提取總RNA。其含有苯酚、異硫氰酸胍等物質(zhì)，能迅速破碎細胞并抑制細胞釋放出的核酸酶。
TRIZOL的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解細胞，使細胞中的蛋白，核酸物質(zhì)解聚得到釋放。苯酚雖可變性蛋白質(zhì)，但不能全部抑制RNA酶活性，因此TRIzol中還加入了8-羥基喹啉、異硫氰酸胍、β-巰基乙醇等來抑制內(nèi)源和外源RNase(RNA酶)。
※0.1%的8-羥基喹啉可以抑制RNase，與氯仿聯(lián)合使用可增強抑制作用。
※異硫氰酸胍屬于解偶劑，是一類蛋白質(zhì)變性劑，可溶解蛋白質(zhì)并使蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)消失，導致細胞結(jié)構(gòu)降解，核蛋白迅速與核酸分離。
※β-巰基乙醇的主要作用是破壞RNase蛋白質(zhì)中的二硫鍵。
十二烷基硫酸鈉（SDS）
CAS：151-21-3
十二烷基硫酸鈉（SDS）陰離子去垢劑,常用于進行SDS-PAGE、DNA提取等需要蛋白變性的操作。高溫(55-65℃)裂解細胞,使染色體離析,蛋白變性,形成SDS/蛋白質(zhì)/多糖復合物,釋放核酸,提高鹽(KAC或NaAc)濃度并降低溫度(冰浴),使SDS/蛋白質(zhì)/復合物轉(zhuǎn)變?yōu)槿芙舛雀〉拟淃}酸形式,使蛋白質(zhì)及多糖雜質(zhì)沉淀更加好、離心后除去沉淀,上清液中的DNA用酚/氯仿抽提,乙醇沉淀水相中的DNA
操作簡單,溫和,可提取到高分子量的DNA,但產(chǎn)物多糖類雜質(zhì)較多
SDS能裂解細胞。使細胞中的蛋白質(zhì)和核酸之間常借著靜電引力或配位鍵結(jié)合,陰離子去污劑能夠破壞這種價鍵,使染色體離析,蛋白變性,釋放核酸。
(1) SDS是一種陰離子表面活性劑,能使蛋白質(zhì)的氫鍵和疏水鍵打開,并結(jié)合到蛋白質(zhì)的疏水部位;
(2) SDS可引起蛋白質(zhì)構(gòu)象改變
(3) SDS是一種良好的解離劑,可使蛋白質(zhì)溶解,變性
(4) 形成SDS-蛋白質(zhì)復合物,并使復合物帶負電
(2) SDS可引起蛋白質(zhì)構(gòu)象改變
(3) SDS是一種良好的解離劑,可使蛋白質(zhì)溶解,變性
(4) 形成SDS-蛋白質(zhì)復合物,并使復合物帶負電
西寶生物核酸提取相關(guān)產(chǎn)品列表
| 產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 包裝 |
| DEPC Diethyl pyrocarbonate 焦碳酸二乙酯(液體) 1609-47-8 | BCE1180A | 25ml |
| Guanidine Thiocyanate 異硫氰酸胍 593-84-0 | ACH0012B | 250g |
| Guanidine hydrochloride 鹽酸胍 50-01-1 | ACH0011A | 1kg |
| Proteinase K 蛋白酶K 39450-01-6 | EBY0027M | 100mg、1kg |
| Sodium dodecyl sulfate 十二烷基硫酸鈉（SDS） 151-21-3 | ACH0017A | 25kg |
| Urea 尿素 57-13-6 | ACH0029E | 500g |
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核酸是分子生物學的基礎(chǔ)，而核酸提取是整個分子行業(yè)繞不過去的門檻，很多時候核酸樣本提取的好壞直接決定了檢測結(jié)果是否生效。多種病毒性疾病檢測多數(shù)采用核酸檢測方法，質(zhì)優(yōu)的核酸提取是保證下游檢測結(jié)果的前提，西寶生物提供多種核心核酸提取試劑，品種齊全，現(xiàn)貨供應(yīng)，省時方便，詳情致電400-021-8158。
核酸提取與純化的應(yīng)用
①分析基礎(chǔ)研究和疾病研究中的基因表達；
②跟蹤對藥療的反應(yīng)（例如，在抗病毒診治期間和之后監(jiān)測病毒滴度）；
③識別新物種并深入了解進化過程（例如，Ancient DNA分析）；
④對人類、動物和植物中引起傳染病暴發(fā)的病原體進行監(jiān)測和分類（例如：2019-nCoV檢測）；
⑤通過微生物檢測和量化監(jiān)測食品和水；
⑥診斷疾病（如基因疾病，癌癥，免疫學缺陷）。
核酸的分離是現(xiàn)代科學的重要成果之一，它給人類生活帶來了大的進步。隨著高通量和自動化提取技術(shù)的應(yīng)用，大大簡化了DNA或RNA的分離過程。此外，下一代測序技術(shù)的發(fā)展推動了核酸分離純化市場的發(fā)展，因為DNA和RNA的純化對獲得準確的核酸數(shù)據(jù)起著極其重要的作用。
核酸提取與純化的原則和要求
1、保證核酸一級結(jié)構(gòu)的完整性
2、排除其它分子的污染（如提取DNA時排除RNA的干擾）
3、核酸樣品中不應(yīng)存在對酶有抑制作用的有機溶劑和高濃度的金屬離子
4、盡可能降低蛋白質(zhì)、多糖和脂類等大分子物質(zhì)
核酸提取純化方法眾多，但關(guān)鍵性試劑原料的質(zhì)量直接影響著核酸提取的純度和質(zhì)量，下面我們介紹一下常見的幾款核酸提取用試劑原料。
焦碳酸二乙酯（DEPC）
CAS：1609-47-8
焦碳酸二乙酯（DEPC）：是一種強烈但不徹底的RNA酶抑制劑，他通過和RNA酶的活性基因團組氨酸的咪唑環(huán)結(jié)合使蛋白質(zhì)變性，從而抑制酶的活性。可以用作抗菌添加劑、組氨酸殘基改性劑，以及用于亞胺轉(zhuǎn)變?yōu)榘被姿狨サ脑噭?/div>蛋白酶K
鹽酸胍 + 尿素
異硫氰酸胍
十二烷基硫酸鈉（SDS）
在溶液中濃度約為 0.1% (v/v) 時可使 RNase 失活，從而防止RNA被降解。
應(yīng)用
用作RNA酶抑制劑。用于提取RNA。
蛋白酶K
CAS：39450-01-6
蛋白酶K是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶，用于生物樣品中蛋白質(zhì)的一般降解。滅活核酸酶(DNase和RNase) , DNase和RNase也用于去除不需要的核酸,有人使用蛋白酶替代DEPC處理水，蛋白酶K是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵。在較廣的pH范圍內(nèi)均有活性(pH4-12.5)溫度范圍37-60度鹽濃度3mGuHCI或4m尿素中均有活性，在一些去污劑:Tween20 (5%)、Triton X-100 (1%)和SDS (1%)條件下也有活性。蛋白酶K的一般工作濃度是50-100ug/ml
蛋白酶K消化裂解法適用于所有標本的消化處理,尤以DNA樣品為佳.如組織細胞(包括石蠟包埋組織)絨毛、毛發(fā)、精斑、血液(血清、血漿、全血)局部分泌物、尿,糞便等。
鹽酸胍 + 尿素
CAS：50-01-1 + CAS：57-13-6
鹽酸胍是一個核酸酶的強抑制劑,它并不是一種足夠強的變性劑,可以允許完整的RNA從富含Rase的組織中提取出來。核酸提取過程中用于使核酸結(jié)合在硅質(zhì)上，4-8M可斷裂氫鍵,有兩種可能機制:
1、變性蛋白和鹽酸胍、尿素優(yōu)先結(jié)合,形成變性蛋白-變性劑復合物,當復合物被除去,從而引起N-D反應(yīng)平衡向右移動,隨著變性劑濃度增加,自然的蛋白不斷轉(zhuǎn)變?yōu)閺秃衔?導致蛋白質(zhì)變性;
2、鹽酸胍、尿素對氨基酸的增溶作用,能形成氫鍵,當濃度高時,能破壞水的氫鍵結(jié)構(gòu),結(jié)果鹽酸胍、尿素就稱為非極性殘基的較好溶劑,使蛋白質(zhì)內(nèi)部的疏水殘基伸展和溶解性加強,鹽酸胍、尿素引起的變性往往是不可逆的。高濃度尿素使蛋白質(zhì)變性并抑制Rnase活性.
應(yīng)用
作為提取細胞總RNA實驗中的強烈變性劑。鹽酸胍溶液可溶解蛋白質(zhì)，導致細胞結(jié)構(gòu)破壞，核蛋白二級結(jié)構(gòu)破壞，從核酸上解離下來，此外，RNA酶可被鹽酸胍等還原劑滅活。
異硫氰酸胍
CAS：593-84-0
異硫氰酸胍作為強力的蛋白質(zhì)變性劑,能迅速溶解蛋白質(zhì),導致細胞結(jié)構(gòu)破碎,核蛋白由于其二級結(jié)構(gòu)的破壞消失而迅速與核酸分離。胍鹽是破壞蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)的離液劑,在通常使用的蛋白質(zhì)變性劑中作用強勁的是異硫氰酸胍,它們可以使多數(shù)蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)換成一隨機的卷曲狀態(tài)。在還原劑存在的情況下,異硫氰酸胍可以斷裂氫鍵。
總RNA抽提試劑常用的是TRIZol法，它可以直接從細胞或組織中提取總RNA。其含有苯酚、異硫氰酸胍等物質(zhì)，能迅速破碎細胞并抑制細胞釋放出的核酸酶。
TRIZOL的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解細胞，使細胞中的蛋白，核酸物質(zhì)解聚得到釋放。苯酚雖可變性蛋白質(zhì)，但不能全部抑制RNA酶活性，因此TRIzol中還加入了8-羥基喹啉、異硫氰酸胍、β-巰基乙醇等來抑制內(nèi)源和外源RNase(RNA酶)。
※0.1%的8-羥基喹啉可以抑制RNase，與氯仿聯(lián)合使用可增強抑制作用。
※異硫氰酸胍屬于解偶劑，是一類蛋白質(zhì)變性劑，可溶解蛋白質(zhì)并使蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)消失，導致細胞結(jié)構(gòu)降解，核蛋白迅速與核酸分離。
※β-巰基乙醇的主要作用是破壞RNase蛋白質(zhì)中的二硫鍵。
十二烷基硫酸鈉（SDS）
CAS：151-21-3
十二烷基硫酸鈉（SDS）陰離子去垢劑,常用于進行SDS-PAGE、DNA提取等需要蛋白變性的操作。高溫(55-65℃)裂解細胞,使染色體離析,蛋白變性,形成SDS/蛋白質(zhì)/多糖復合物,釋放核酸,提高鹽(KAC或NaAc)濃度并降低溫度(冰浴),使SDS/蛋白質(zhì)/復合物轉(zhuǎn)變?yōu)槿芙舛雀〉拟淃}酸形式,使蛋白質(zhì)及多糖雜質(zhì)沉淀更加好、離心后除去沉淀,上清液中的DNA用酚/氯仿抽提,乙醇沉淀水相中的DNA
操作簡單,溫和,可提取到高分子量的DNA,但產(chǎn)物多糖類雜質(zhì)較多
SDS能裂解細胞。使細胞中的蛋白質(zhì)和核酸之間常借著靜電引力或配位鍵結(jié)合,陰離子去污劑能夠破壞這種價鍵,使染色體離析,蛋白變性,釋放核酸。
(1) SDS是一種陰離子表面活性劑,能使蛋白質(zhì)的氫鍵和疏水鍵打開,并結(jié)合到蛋白質(zhì)的疏水部位;
(2) SDS可引起蛋白質(zhì)構(gòu)象改變
(3) SDS是一種良好的解離劑,可使蛋白質(zhì)溶解,變性
(4) 形成SDS-蛋白質(zhì)復合物,并使復合物帶負電
(2) SDS可引起蛋白質(zhì)構(gòu)象改變
(3) SDS是一種良好的解離劑,可使蛋白質(zhì)溶解,變性
(4) 形成SDS-蛋白質(zhì)復合物,并使復合物帶負電
西寶生物核酸提取相關(guān)產(chǎn)品列表
| 產(chǎn)品名稱 | 貨號 | CAS | 包裝 |
| DEPC Diethyl pyrocarbonate 焦碳酸二乙酯(液體) | BCE1180A | 1609-47-8 | 25ml |
| Guanidine Thiocyanate 異硫氰酸胍 | ACH0012B | 593-84-0 | 250g |
| Guanidine hydrochloride 鹽酸胍 | ACH0011A | 50-01-1 | 1kg |
| Proteinase K 蛋白酶K | EBY0027M | 39450-01-6 | 100mg、1kg |
| Sodium dodecyl sulfate 十二烷基硫酸鈉（SDS） | ACH0017A | 151-21-3 | 25kg |
| Urea 尿素 | ACH0029E | 57-13-6 | 500g |
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